Пищевые добавки методические указания

Основные методические подходы к экспериментальной

оценке эффективности БАД-парафармацевтиков

Большое разнообразие адаптационных неспецифических защитно-приспособительных реакций организма на раздражители различного рода крайне затрудняет оценку функциональной активности БАД-парафармацевтиков на системы сохранения динамического гомеостаза организма. Однако, как известно, все системы, участвующие в реакциях острой фазы, тесно связаны друг с другом посредством различного рода медиаторов, пептидов, гормонов, трофических факторов, лимфокинов через соответствующий рецепторный аппарат (136). Иными словами, любое изменение одной системы обязательно приводит к изменениям в других системах. В этой связи выбор исследуемых систем диктуется набором преимущественных эффектов БАД-парафармацевтика.

Как известно, основным эффектом БАД-парафармацевтиков является повышение резистентности организма к инфекциям, стрессорным, агрессивным воздействиям химической и физической природы. Такие эффекты БАД-парафармацевтиков в большинстве случаев обусловлены положительным влиянием их на различные звенья иммунной и детоксикационной систем организма и другие общие механизмы адаптационно-приспособительных реакций, в т.ч. за счет поддержания функции антиоксидантных систем организма.

Вышеизложенное позволяет констатировать, что оптимальная схема определения функциональной активности БАД-парафармацевтиков должна включать изучение их влияния на систему иммунитета, резистентность к стрессорным воздействиям разнообразной природы (физическая нагрузка, длительный стресс, химические и т.д.) и на окислительно-антиокислительный статус организма. Правильность именно такого подхода к экспериментальной оценке эффективности БАД-парафармацевтиков вытекает из известных и многократно доказанных учеными разных стран фактах о том, что поражение именно этих систем лежит в основе наиболее распространенных заболеваний человека. Взаиморегуляция нервной, иммунной и окислительно-антиокислительной систем определяет надежность их совместной деятельности. Нарушение же функциональной активности одной из этих систем резко повышает риск развития функциональных расстройств общих механизмов защитно-приспособительных реакций на воздействие факторов окружающей и внутренней среды организма человека. Так, например, нарушение нейрорегуляторных механизмов реализации адаптационного синдрома может играть важную роль в патогенезе иммунологических расстройств и дизрегуляции радикальных окислительных процессов, а иммунологические механизмы, в свою очередь, могут участвовать в патогенезе заболеваний центральной нервной системы и формировании окислительного стресса (136).

Учитывая это, для большей информативности и удешевления исследований эффективности БАД-парафармацевтиков следует использовать унифицированные экспериментальные модели. Примером может служить модель истощающей физической нагрузки, которая кроме непосредственного изучения адаптогенного действия БАД-парафармацевтика дает возможность исследования его влияния на показатели иммунной (ФНО, ИЛ-2) и окислительно-антиокислительной (МД, каталаза) систем. Использование данной модели позволяет установить функциональную, энантиостатическую безопасность <*> (Mangum, Towle, 1977) БАД-парафармацевтиков для здоровья человека, тем самым предопределяя обязательность такого рода исследований.

——————————–

<*> Энантиостатическая безопасность – поддержание функции.

В случае, когда назначение БАД-парафармацевтика предполагает наличие какого-либо преимущественного эффекта или эффектов (радиопротекторного, иммуномодулирующего, антиоксидантного и т.д.) необходимо дополнительное изучение активности таких БАД в экспериментах, моделирующих соответствующие нарушения.

Так, для определения специфических эффектов БАД-парафармацевтиков можно использовать следующие методические подходы:

– радиопротекторного действия БАД-парафармацевтиков – мышей облучают сублетальными дозами рентгеновского излучения (200 – 300 Рад) и изучают влияние БАД на показатели иммунной системы, с добавлением методов оценки пролиферативной и антителообразующей активности клеток селезенки и ОАО системы;

– иммуномодулирующего действия БАД-парафармацевтиков – мышам вводят циклофосамид или циклоспорин А (применение того или иного иммунодепрессанта определяется преимущественным действием БАД на конкретное звено иммунной реакции) и изучают влияние БАД на показатели иммунной системы с добавлением методов определения пролиферативной и антителообразующей активности клеток селезенки мыши;

– антиоксидантного действия – мышам вводят раствор четыреххлористого углерода и изучают показатели ОАО системы, с добавлением методов определения диеновой коньюгации ПНЖК и гидроперекиси липидов;

– резистентности к инфекциям – мышей заражают штаммом S.typhi и изучают показатели иммунной системы с добавлением метода определения неспецифической резистентности к инфекциям;

– изучение адаптогенного действия парафармацевтиков проводят на стандартных моделях различных экстремальных условий (повышенная физическая нагрузка, гиподинамия), а также исследуют эмоциональные поведенческие реакции животных.

Источник

13. О ПОРЯДКЕ ПРОВЕДЕНИЯ КЛИНИЧЕСКИХ ИСПЫТАНИЙ БИОЛОГИЧЕСКИ

АКТИВНЫХ ДОБАВОК К ПИЩЕ

1. При направлении Федеральным центром госсанэпиднадзора в экспертный совет Института питания РАМН материалов для проведения гигиенической экспертизы и выдачи заключения с целью последующей государственной регистрации какого-либо типа БАД вопрос о необходимости проведения клинических испытаний этой БАД решается главным экспертом экспертного совета.

2. Клинические испытания биологически активных добавок к пище осуществляются, как правило, в контролируемых условиях стационара или в амбулаторных условиях в специализированных учреждениях, которые располагают квалифицированными специалистами в области науки о питании или в соответствующей области медицины, современным научным оборудованием, хорошей многопрофильной клинической базой и аккредитованных на проведение подобных исследований в порядке, установленном МЗ РФ.

3. Образцы биологически активных добавок к пище предоставляются фирмой в том количестве, которое предусматривается программой испытания.

4. Схема проведения испытаний биологически активных добавок к пище включает следующие этапы:

– экспериментальную и/или аналитическую оценку основных компонентов БАД к пище на основании представленной фирмой-производителем документации и результатов исследований (см. разделы 4, 5, 6);

– разработку программ клинических испытаний биологически активных добавок к пище, которая определяется, с одной стороны, особенностями химического состава и предполагаемого биологического действия исследуемых БАД на организм, применительно к тем нозологическим формам заболевания, при которых использование добавок с профилактической целью представляется наиболее адекватным и перспективным, а с другой стороны, типом функциональных и метаболических нарушений, свойственных данной патологии;

– определение методики проведения клинических испытаний. Для получения достоверных данных о профилактическом действии БАД к пище необходимым условием является наличие двух групп: основной (опытной) и контрольной. Они могут формироваться из здоровых лиц или больных с определенной патологией. Группы сравнения должны быть максимально сходными по половозрастному признаку, массе тела, пищевому статусу. В случае проведения испытаний на больных помимо этого учитывается степень тяжести основного заболевания, характер сопутствующей патологии. Оценка эффективности БАД к пище осуществляется на фоне идентичных режимов питания в опытной и контрольной группах. Предпочтительным при этом является использование двойного слепого метода испытаний с применением плацебо в контрольной группе. В процессе проведения клинических испытаний определяются органолептические свойства БАД и их переносимость, осуществляется оценка их эффективности, выявление возможных побочных эффектов;

– помимо общих клинических показателей в план исследований включаются гематологические и специальные функциональные тесты, биохимические, микробиологические, иммунологические и другие показатели. Выбор критериев оценки эффективности апробируемых БАД к пище определяется характером испытуемых БАД и клинико-патогенетическими особенностями нозологических форм, при которых они применяются;

– продолжительность клинической апробации устанавливается в зависимости от типа БАД к пище и по согласованию с фирмой-заявителем;

– в заключении по итогам испытания БАД должны быть представлены результаты изучения переносимости БАД, ее эффективности, рекомендуемая дозировка БАД, показания к применению, возможные побочные эффекты.

Источник

1. РАЗРАБОТАНЫ:
Федеральным центром госсанэпиднадзора Минздрава России
(В.И.Чибураев, к. м. н. И.В.Брагина, Ю.В.Килина); Медицинским
радиологическим научным центром РАМН (академик РАМН, д. м. н.,
профессор А.Ф.Цыб, к. х. н. Л.Л.Бозаджиев); ООО НПП “Медбиофарм”
(Д.Г.Скрипник, О.Н.Побережная); ООО “Эконикс-Эксперт” (к. х. н.
Н.К.Зайцев, В.В.Юрицын, к. х. н. М.В.Гришечкина, Д.М.Федулов); при
участии ЦГСЭН в Смоленской, Тульской областях, Республике Карелия и
др.

2. УТВЕРЖДЕНЫ 29 июня
2003 г. и введены в действие 30 июня 2003 г. Главным
государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым
заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации
Г.Г.Онищенко.

3. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

1.
Область применения

1.1. Настоящий документ
устанавливает методику выполнения измерения (МВИ) массовой
концентрации йода в пищевых продуктах, продовольственном сырье,
пищевых и биологически активных добавках вольтамперометрическим
методом.

Вариант 1 – методом
прямой и инверсионной переменно-токовой полярографии со
стационарным ртутным электродом (электрод висящей капли – ЭВК);

Вариант 2 – методом
постоянно-токовой инверсионной вольтамперометрии с углеродным
электродом.

1.2. Объекты анализа по
настоящей МВИ приведены в табл.1.

Таблица
1

N группы объектов	Объект анализа
1	Мука, крупа, зерно и продукты их переработки. Хлеб, хлебобулочные и кондитерские изделия
2	Рыба, мясо и продукты их переработки (включая консервы), морепродукты. Яйцо. Яичный порошок
3	Твердые и пастообразные молочно-кислые продукты. Сыры, творог. Дрожжи
4	Добавки пищевые и биологически активные (БАД)
5	Молоко, жидкие молочные и кисло-молочные продукты
6	Жиры растительные и животные, масло, маргарин
7	Вода минеральная и питьевая, напитки безалкогольные и слабоалкогольные
8	Соль пищевая, йодированная

Примечание. В прилож.1
приведены данные о содержании йода в некоторых объектах анализа,
обогащенных йодом (кроме морепродуктов).

1.3. Диапазоны линейной
зависимости аналитического сигнала йода в анализируемом растворе
пробы в ячейке, мг/дм.

Вариант 1:

–
от 0,1 до 50 – прямая переменно-токовая полярография;

–
от 0,005 до 0,5 – инверсионная переменно-токовая полярография.

Вариант 2:

от 0,005 до 0,5.

1.4. При превышении в
анализируемом растворе пробы половины верхнего предела диапазона
линейной зависимости после пробоподготовки проводят
последовательное разбавление пробы бидистиллированной водой с таким
расчетом, чтобы в разбавленном растворе пробы концентрация йода
находилась в диапазоне линейной зависимости аналитического
сигнала.

В
том случае, если концентрация йода в анализируемой пробе меньше
нижнего предела диапазона линейной зависимости, пробу
предварительно концентрируют.

1.5. Определению йода
мешает присутствие в анализируемом растворе пробы органических
веществ.

Органические вещества
удаляют “сухой” минерализацией в соответствии с п.8.2.

2.
Характеристика погрешности измерений

2.1. Границы допускаемой
относительной погрешности измерений (при доверительной вероятности
=0,95) концентраций йода по данной методике
приведены в табл.2.

Таблица
2

Характеристика погрешности и ее составляющих
Диапазоны измеряемой концентрации в анализируемом растворе пробы, мкг/дм	границы относительной погрешности (=0,95) ,%	относительное среднее квадратическое отклонение случайной составляющей погрешности ,%	границы неисключенной систематической составляющей погрешности (=0,95) ,%
Вариант 1
от 0,005 до 10 вкл.	40	12	12
св. 10 до 5·10	20	10	10
Вариант 2
от 0,004 до 0,015 вкл.	30	13	11
св. 0,015 до 0,5	25	11	11

3.
Средства измерений, вспомогательные устройства, посуда, реактивы и
материалы

3.1. Средства измерений

3.1.1. Средства измерений, общие для вариантов 1 и 2
Вольтамперометрический анализатор “Экотест-ВА” в комплекте с IBM совместимым компьютером	ТУ 4215-003-41541647
Электрод вспомогательный лабораторный хлорсеребряный ЭВЛ 1М3.1	ТУ 25.052181
Электрод платиновый лабораторный ЭПВ-1	ТУ 25-05 (IЕ2.840.518)
Весы лабораторные аналитические общего назначения с наибольшим пределом взвешивания 200 г, 2-го класса точности	ГОСТ 24104
Меры массы Г-2-210	ГОСТ 7328
Колбы мерные 2-25-2, 2-50-2, 2-100-2, 2-200-2, 2-250-2, 2-500-2, 2-1000-2	ГОСТ 1770
Цилиндры мерные лабораторные с носиком 1-25-2, 1-50-2, 1-100-2	ГОСТ 1770
Пипетки градуированные 2-го класса точности, вместимостью 1, 2, 5 и 25 см	ГОСТ 29227
Пипетки мерные 2-2-1, 2-2-2, 2-2-5, 2-2-10, 2-2-20, 2-2-25	ГОСТ 29169
Пробирки мерные исполнения 1 (центрифужные), вместимостью 10, 20 см	ГОСТ 1770
Пробирки мерные лабораторные исполнения 2 (со шлифами), вместимостью 10, 20 см	ГОСТ 1770
Государственный стандартный образец (ГСО) состава водных растворов йодид-ионов (Массовая концентрация йодид-ионов 1000 мг/дм. Относительная погрешность аттестованного значения стандартного образца не превосходит 1,0% для доверительной вероятности 0,95)	ГСО 6086
3.1.2. Средства измерений для варианта 1
Стационарный электрод (электрод висящей капли)	ТУ 5.5519.005
3.1.3. Средства измерений для варианта 2
Углеродный электрод	КТЖГ.414324.003
рН-метр-иономер “Эксперт-001”	ТУ 4215-001-52722949
Электрод стеклянный комбинированный ЭСК 10601/7	ТУ 4215-004-35918409
Примечание. Допускается использование других средств измерений с аналогичными или лучшими метрологическими характеристиками.
3.2. Вспомогательное оборудование, общее для вариантов 1 и 2
Электропечь камерная лабораторная или муфельная печь с погрешностью поддержания температуры ±25 °С в интервале от 150 до 600 °С	ТУ 16-531.704
Электрошкаф сушильный лабораторный с погрешностью поддержания температуры ±2,5 °С в интервале от 50 до 350 °С	ТУ 16-531.639
Холодильник бытовой	ГОСТ 16317
Центрифуга лабораторная ОПН-8 (не менее 1500 об./мин)	ТУ 5.375-4261
Бидистиллятор или аппарат для перегонки воды (кварцевый или стеклянный)	ТУ 25-11.1592
Мешалка магнитная типа УММ 5 с перемешивающим стержнем, управляемая от вольтамперометрического анализатора “Экотест-ВА”	КТЖГ.418434.001
Электроплитка с закрытой спиралью	ГОСТ 14919
Баня водяная	ТУ 64-1.2850
Холодильник обратный, тип ХПТ-1-200-14/23	ГОСТ 25336
Стаканы стеклянные лабораторные с носиком и без носика, вместимостью 50, 100, 150, 250 см	ГОСТ 25336
Стаканы лабораторные термостойкие, вместимостью 1000 см	ГОСТ 25336
Колба плоскодонная ПКШ, вместимостью 750 см	ГОСТ 10394
Колба круглодонная К-1-50-1 4/23, вместимостью 50 см	ГОСТ 25336
Чашки выпаривательные фарфоровые, вместимостью 100 см	ГОСТ 9147
Ступки и пестики фарфоровые	ГОСТ 9147
Бутыли полиэтиленовые светонепроницаемые для хранения реактивов, вместимостью от 150 до 500 см	ТУ 6-19-45
Воронки типа В (лабораторные)	ГОСТ 25336
Микроизмельчитель ткани РТ-2	ТУ 64-1-1505
Щипцы тигельные ЩТ	ТУ 64-1.973
Насос для мерных пипеток “Bio Mark” или резиновая груша
Штатив лабораторный ШЛ-96	5М4.110.001 ЭТ
Примечание. Применяемые средства измерений и вспомогательное оборудование должны быть исправны и иметь техническую документацию. Средства измерений должны быть поверены в соответствии с ПР 50.2.006, вспомогательное оборудование – аттестовано в соответствии с ГОСТ Р 8.568-97.
3.3. Реактивы и материалы
3.3.1. Реактивы и материалы, общие для вариантов 1 и 2
Калий йодистый, ч. д. а. (содержание КI не менее 99,99%) – в отсутствие ГСО		ГОСТ 4232
Калий азотнокислый, х. ч.		ГОСТ 4217
Калий гидроокись, ч. д. а.		ГОСТ 1439
Кислота азотная, ос. ч.		ГОСТ 11125
Калий хлористый, х. ч.		ГОСТ 4234
Вода бидистиллированная
Фильтры обеззоленные		ТУ 6-09-1678
Бумага индикаторная универсальная		ПНД 50-975
Кислота серная, ч. д. а.		ГОСТ 4204
Бумага фильтровальная лабораторная		ГОСТ 12026
3.3.2. Реактивы и материалы для варианта 1
Кислота аскорбиновая, фармакопейная		ФСП 420002-0359
Ртуть металлическая, марка Р1		ГОСТ 4658
Спирт этиловый высшей очистки (для подготовки рабочего электрода)		ГОСТ 18300
3.3.3. Реактивы и материалы для варианта 2
Калий бромистый, ч. д. а.		ГОСТ 4160
Четвертичное аммониевое основание, ч. д. а.		КТЖГ.414324.003

Примечание 1. Допускается
использование реактивов более высокой квалификации.

Примечание 2.
Бидистиллированную воду получают путем повторной перегонки
дистиллированной воды в бидистилляторе или лабораторной установке
для перегонки воды, выполненной из кварца или стекла.

3.4. Приготовление растворов, общих для вариантов 1 и
2

Все растворы (кроме
п.3.4.4) готовят при температуре (20±5) °С, используя только
бидистиллированную воду (далее по тексту – вода).

3.4.1. Градуировочные растворы йодистого калия

В
случае приготовления градуировочных растворов из калия йодистого
(п.3.3.1) основной раствор с массовой концентрацией йодид-ионов
1000 мг/дм готовят согласно прилож.2. Далее по
п.п.3.4.1.1-3.4.1.4.

3.4.1.1. Калий йодистый,
градуировочный раствор с массовой концентрацией йодид-ионов 100
мг/дм.

В
мерную колбу вместимостью 50 см вносят пипеткой 5 см раствора ГСО 6086. Доводят объем раствора в
колбе до метки водой и перемешивают. Погрешность приготовления
раствора не более 1,5%. Срок хранения – 2 месяца.

3.4.1.2. Калий йодистый,
градуировочный раствор с массовой концентрацией йодид-ионов 10,0
мг/дм.

В
мерную колбу вместимостью 100 см вносят пипеткой 10 см раствора йодид-ионов с концентрацией 100
мг/дм (п.3.4.1.1). Доводят объем раствора в колбе
до метки водой и перемешивают. Погрешность приготовления раствора
не более 1,8%. Срок хранения – 2 недели.

3.4.1.3. Калий йодистый,
градуировочный раствор с массовой концентрацией йодид-ионов 1,00
мг/дм.

В
мерную колбу вместимостью 100 см вносят пипеткой 10 см раствора йодид-ионов с концентрацией 10,0
мг/дм (п.3.4.1.2). Доводят объем раствора в колбе
до метки водой и перемешивают. Погрешность приготовления раствора
не более 2,0%. Раствор готовят непосредственно перед анализом.

3.4.1.4. Калий йодистый,
градуировочный раствор с массовой концентрацией йодид-ионов 0,100
мг/дм.

В
мерную колбу вместимостью 100 см вносят пипеткой 10 см раствора йодид-ионов с концентрацией 1,00
мг/дм (п.3.4.1.3). Доводят объем раствора в колбе
до метки водой и перемешивают. Погрешность приготовления раствора
не более 2,3%. Раствор готовят непосредственно перед анализом.

3.4.2. Калий азотнокислый, 0,5 М раствор

Навеску калия
азотнокислого массой (50,5±0,1) г переносят в мерную колбу
вместимостью 1 дм и добавляют 200-500 см воды. Доводят объем раствора в колбе до
метки водой. Срок хранения – 6 месяцев.

3.4.3. Калия гидроокись, 1 М раствор

Навеску калия гидроокиси
массой (28,0±0,1) г небольшими порциями переносят в термостойкий
стакан вместимостью 1000 см, содержащий 200-300 см воды, и растворяют при постоянном
перемешивании раствора стеклянной палочкой. После охлаждения до
комнатной температуры раствор переносят в мерную колбу вместимостью
500 см и доводят объем раствора в колбе до метки
водой. Раствор хранят в плотно закрытой полиэтиленовой посуде. Срок
хранения – 6 месяцев.

3.4.4. Калий хлористый, насыщенный раствор

Навеску хлористого калия
массой (175,0±0,1) г растворяют при нагревании до температуры
t=50-80 °С в 500 см воды. Горячий раствор фильтруют через
бумажный фильтр в коническую колбу и хранят в контакте с выпавшими
при охлаждении кристаллами. Срок хранения – 6 месяцев.

3.5. Приготовление растворов для варианта 1

3.5.1. Кислота аскорбиновая, раствор 25 г/дм

Навеску аскорбиновой
кислоты массой (2,5±0,1) г переносят в мерную колбу вместимостью
100 см и добавляют 30-50 см воды. Доводят объем раствора в колбе до
метки водой и перемешивают. Раствор готовится в день измерения.

3.5.2. Кислота серная, 1,5 М раствор

В
мерную колбу вместимостью 500 см вносят 250-300 см воды. Затем к воде осторожно приливают
пипеткой 43,3 см концентрированной серной кислоты (95%
HSO). Содержимое колбы тщательно перемешивают и
доводят раствор до метки водой. Срок хранения – 6 месяцев.

Внимание! Нельзя наливать
концентрированную кислоту в пустую колбу и приливать к
концентрированной кислоте воду.

3.6. Приготовление растворов для варианта 2

3.6.1. Кислота серная, 1 М раствор

100-150 см воды вносят цилиндром в мерную колбу,
вместимостью 250 см. Затем к воде осторожно приливают пипеткой
13,3 см концентрированной серной кислоты (95%
HSO). Содержимое колбы тщательно перемешивают и
доводят раствор до метки водой. Срок хранения – 6 месяцев.

Внимание! Техника
безопасности при работе с серной кислотой по п.3.5.2.

3.6.2. Калий бромистый, 0,1 М раствор

Навеску калия бромистого
массой (1,20±0,05) г переносят в мерную колбу вместимостью 100
см и добавляют 20-50 см воды. Доводят объем раствора в колбе до
метки водой и перемешивают. Срок хранения – 1 месяц.

3.6.3. Четвертичное аммониевое основание

Навеску четвертичного
аммониевого основания массой (0,185±0,005) г переносят в мерную
колбу вместимостью 250 см и добавляют 20-50 см воды. Доводят объем раствора в колбе до
метки водой и перемешивают. Срок хранения – 1 месяц.

4.
Принцип метода измерения

4.1. Вариант

1. Метод измерения на стационарном ртутном электроде
(ЭВК)

Метод основан на
применении прямой переменно-токовой полярографии (при концентрации
йода в электрохимической ячейке в диапазоне от 1,0 до 500
мг/дм) и инверсионной переменно-токовой
полярографии (при концентрации йода в электрохимической ячейке в
диапазоне от 0,005 до 2,0 мг/дм) по 3-электродной схеме измерения
аналитического сигнала на стационарном ртутном электроде (в виде
висящей ртутной капли) в предварительно подготовленных пробах.

В
основе метода инверсионной переменно-токовой полярографии лежит
предварительное накопление ионов йода на поверхности капли ртути с
образованием нерастворимой соли

Источник

Пищевые добавки методические указания

1. Область применения

2. Характеристика погрешности измерений

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, посуда, реактивы и материалы

4. Принцип метода измерения

1.
Область применения

2.
Характеристика погрешности измерений

3.
Средства измерений, вспомогательные устройства, посуда, реактивы и
материалы

4.
Принцип метода измерения