Какое значение в жизни имеет свойство самокопирования днк
МОСКВА, 10 окт – РИА Новости. Жизнь могла зародиться в “супе” первичного океана Земли благодаря наличию в его водах своеобразного “загустителя”, который позволял первым молекулам ДНК вступать в реакции самокопирования, которые ранее считались невозможными, говориться в статье, опубликованной в журнале Nature Chemistry.
“Заплыв в таком “первичном супе” можно сравнить с тем, что чувствует человек, плавающий в чане с медом. Подобный густой раствор дает коротким цепочкам нуклеотидов и единичным “буквам” ДНК, которые движутся быстро, достаточно времени для того, чтобы “запрыгнуть” на более длинные цепочки ДНК, соединиться друг с другом и образовать их копии”, — объясняет Кристина Хе (Christine He) из Технологического института Джорджии в Атланте (США).
Жизнь в луже
По общепринятой на сегодня теории “РНК-мира”, роль белков и ДНК в первых живых организмах на земле играли молекулы РНК. В последствие клеточными процессами стали управлять белки, а роль хранилища генетической информации заняла ДНК. Сегодня ученые экспериментируют с короткими молекулами РНК, пытаясь воспроизвести процесс зарождения жизни в лаборатории.
Одним из главных препятствий в повторении этого процесса является то, что в “нормальном” растворе молекулы ДНК не способны вступать в реакции самокопирования без наличия тех ферментов, которые мешают половинкам двойных цепочек ДНК “сворачиваться” обратно в спираль. Так как сложные белки вряд ли могли возникнуть сами по себе без участия ДНК, это заставляет многих ученых предполагать, что РНК и ДНК возникли одновременно, минуя фазу “РНК-мира”.
Хе и ее коллеги по университету нашли потенциальное решение этой проблеме в простой вещи – обычном загустителе, который можно купить в любом магазине. Как предположили ученые и как считают многие другие биохимики, жизнь на Земле могла зародиться не в мировом океане, а в пересыхающих лужах у жерл вулканов или у берегов морей, чьи воды действительно больше напоминали густой “суп”, чем рассол или раствор чего-либо.
Экспериментируя с различными наборами коротких молекул ДНК, американские биологи проверили, что произойдет, если в смесь, содержащую одиночные нуклеотиды и небольшие двойные спирали ДНК, добавить загуститель.
Этот простой шаг привел к необычным последствиям – двойные цепочки ДНК действительно перестали быстро пересоединяться друг с другом, однако “половинки” этих спиралей плавали внутри первичного “мёда” не в виде одиночных нитей, а сворачиваясь в своеобразные петли, которые биологи называют “шпильками”.
Шпильки в колеса
Эти шпильки, как объясняют ученые, препятствовали воссоединению нитей и позволяли плавающим в растворе нуклеотидам присоединяться к “половинкам” ДНК и формировать вторую нить, представлявшую собой их копии.
Эту идею ученые проверили на фрагменте одного из реально существующих генов длиной в 540 генетических “букв”, который им удалось заставить скопировать себя как в относительно “чистом” растворе, содержащем только нуклеотиды, так и при попадании в своеобразные аналоги “первичного супа”.
Если нечто подобное происходило и в “супе” первичных океанов (или луж) Земли, то тогда процесс формирования “шпилек” мог решать сразу две задачи. Во-первых, он позволял молекулам ДНК и РНК копировать себя.
Во-вторых, он также приводил к формированию петель и особых зон внутри нитей РНК, превращая их в ферменты-рибозимы – самокопирующиеся молекулы, способные осуществлять разные реакции. Рибозимы сегодня считаются одним из ключевых шагов в процессе зарождения жизни.
Относительно “легкий” механизм их образования в присутствии “загустителя”, как считают авторы статьи, не только объясняет то, как ДНК и РНК могли эволюционировать на Земле, говорит о достаточно высоких шансах на зарождение жизни за пределами Солнечной системы.
Источник
25 апреля в 1953 году британские молекулярные биологи Джеймс Уотсон и Фрэнсис Крик открыли химическую структуру молекулы ДНК, которую мы сегодня знаем как двойную спираль. Всемирный день ДНК отмечается 25 апреля в ознаменование достижений двух британских ученых.
ДНК, сокращение от дезоксирибонуклеиновая кислота, содержит генетические инструкции для развития и функционирования живого существа – и вот несколько вещей, которые вы, возможно, захотите узнать об этом ключевом компоненте жизни в вашем теле.
10. Эксперименты по трансформации бактерий доказали: ДНК – носитель информации
ДНК как носитель генетической информации стала известна к концу 1940-х годов (Weaver, 2002). Однако ее структура никогда не была понята. Именно тогда, когда Розалинда Франклин сделала рентгеновский анализ (1952) кристаллизованного раствора ДНК, началось предположение о структуре ДНК.
ДНК представляет собой структурную последовательность нуклеиновой кислоты, в которой информация кодируется в единицу, называемую генами. Информация, передаваемая потомству, не может быть получена только с помощью ДНК. Этот процесс сопровождается различными РНК.
Информация, содержащаяся в четырех базовых языках ДНК – A, G, U & T, копируется в четыре базовых языка РНК, то есть A, G, C & U, через процесс, называемый Транскрипцией.
9. У всех людей есть частичка ДНК неандертальцев, кроме африканцев
Когда наши предки впервые переселились из Африки около 70 000 лет назад, они были не одни. В то время по меньшей мере два других вида двоюродных братьев-гоминидов шли по евразийскому континенту – неандертальцы и денисовцы.
Когда наши современные человеческие предки мигрировали через Евразию, они столкнулись с неандертальцами и скрещивались. Из-за этого небольшое количество ДНК неандертальца было введено в современный человеческий генофонд.
Каждый человек, живущий за пределами Африки, сегодня имеет в себе небольшое количество неандертальцев, которые являются живым пережитком этих древних столкновений.
Команда ученых, сравнивая полные геномы двух видов, пришла к выводу, что большинство европейцев и азиатов имеют примерно 2% ДНК неандертальцев. Коренные африканцы к югу от Сахары не имеют или имеют очень мало ДНК неандертальцев, потому что их предки не мигрировали через Евразию.
8. ДНК всех людей на 99,9% одинаковы
Наши тела имеют 3 миллиарда генетических строительных блоков или базовых пар, которые делают нас теми, кто мы есть. И из этих 3 миллиардов пар оснований только небольшое количество уникально для нас, что делает нас примерно на 99,9% генетически похожими на любого другого человека.
Недавнее выступление физика и предпринимателя Риккардо Сабатини на TED показало, что печатная версия всего вашего генетического кода займет около 262 000 страниц или 175 больших книг. Из этих страниц только около 500 были бы уникальными для нас.
7. Около 2 гр ДНК могут вместить всю мировую информацию в цифровом виде
Как все лучшие идеи, этот вопрос родился в пабе. Ник Голдман и Юэн Бирни из Европейского института биоинформатики (EBI) под Кембриджем размышляли о том, что они могут сделать с потоком геномных данных, которые генерирует их исследовательская группа, и все они должны быть заархивированы.
Объем данных растет быстрее, чем емкость жестких дисков, используемых для его хранения. «Это означает, что стоимость хранилища растет, а наши бюджеты – нет», – говорит доктор Голдман.
За несколькими сортами пива пара задумалась, может ли искусственно сконструированная ДНК быть одним из способов хранения потока данных, сгенерированного природным материалом.
Мало того, что 1 грамм ДНК может содержать 455 эксабайт данных (этого достаточно для хранения всего, от Google, Facebook и любой другой крупной технологической компании вместе взятых), она также очень долговечна.
6. Период распада ДНК 521 год
В 2013 следователи по делу об убийствах в Бостоне-Стренглере, которые произошли в 1960-х годах, заявили, что ДНК, взятая с одеяла на одном из мест преступления, очень близко совпадает с ДНК члена семьи Альберта ДеСальво, подозреваемого в убийстве.
Таким образом, полученные данные связывают ДеСальво с местом преступления. Официальные лица теперь имеют разрешение эксгумировать останки ДеСальво, который умер в 1973 году, чтобы проверить ДНК его тела и подтвердить совпадение, сообщает New York Times.
В 2012 году исследователи подсчитали, что период полураспада ДНК – точка, в которой половина связей в основной цепи молекулы ДНК будет разорвана, – 521 год. Это означает, что в идеальных условиях ДНК прослужит около 6,8 миллионов лет, после чего все связи будут разорваны.
5. На МКС хранится жесткий диск с человеческими ДНК
«Диск бессмертия» – это большое устройство памяти, которое было доставлено на Международную космическую станцию на космическом корабле «Союз» 12 октября 2008 года.
«Диск бессмертия» содержит полностью оцифрованные последовательности ДНК избранной группы людей, таких как физик Стивен Хокинг, комик и ведущий шоу Стивен Колберт, модель Playboy Джо Гарсия, гейм-дизайнер Ричард Гэрриот, авторы фэнтези Трейси Хикман и Лора Хикман, профессиональный рестлер Мэтт Морган и спортсмен Лэнс Армстронг.
Микрочип также содержит копию «Секретного ключа Джорджа ко Вселенной», детскую книгу, написанную Стивеном Хокингом и его дочерью Люси.
Цель «Бессмертного влечения» – сохранить ДНК человека в капсуле времени на случай, если на Земле произойдет глобальный катаклизм.
4. Тесты ДНК показывают, что все гепарды почти полностью идентичны
Генетическая изменчивость является ключевым компонентом эволюции. Популяция с низкой генетической изменчивостью является чем-то вроде сидячей утки, уязвимой для всех видов изменений окружающей среды, вопреки которым может сохраняться более изменчивая популяция.
И, к сожалению, именно с такими обстоятельствами сегодня сталкиваются гепарды. Как вид, гепарды имеют низкий уровень генетической изменчивости. Это, вероятно, можно объяснить небольшим местом населения, в котором они обитали около 10 000 лет назад, едва избежав вымирания в конце последнего ледникового периода.
Однако в наше время ситуация ухудшилась. Посягательство на среду обитания и браконьерство еще больше снижают численность гепардов, в результате чего уничтожаются еще больше генетических вариаций, а гепарды становятся еще более уязвимыми к исчезновению.
3. ДНК близнецов похожи только в момент зачатия
Это основной принцип человеческой биологии, который преподают в начальных школах повсюду: идентичные близнецы происходят из одного оплодотворенного яйца и, таким образом, имеют идентичные генетические характеристики.
Но давно стало известно, что у идентичных близнецов развиваются различия, возникающие в результате воздействия окружающей среды. И в последние годы также было показано, что некоторые из их различий могут быть вызваны уникальными изменениями в так называемых эпигенетических факторах, химических маркерах, которые прикрепляются к генам и влияют на то, как они экспрессируются – в некоторых случаях путем замедления или остановки гены выключены, а в других путем увеличения их производства.
2. ДНК всех клеток тела можно растянуть на 16 млрд км
Если бы ДНК во всех клетках человеческого тела не была свернута, она растянулась бы на 16 миллиардов километров. Для сравнения: зависимости от местоположения на их орбитах, расстояние от Земли до Плутона варьируется от 4 до 7,5 миллиардов километров.
1. ДНК может определять риски заболеваний
Тестирование ДНК для прогнозирования риска заболевания может предотвратить заболевание и спасти жизни. ДНК-скрининг будет включать в себя большое количество здоровых людей, проходящих тестирование ДНК путем предоставления простого образца крови или слюны для выявления риска определенных состояний. Тестирование включает типы рака или болезни сердца, которые происходят в семьях – и могут быть предотвращены.
Источник
В земной жизни способом образования новых клеток является ми-тотическое деление уже существующих. Этот процесс организован в форме митотического (пролиферативного) цикла, решающего важнейшую биоинформационно-генетическую задачу – обеспечение клеток дочерних поколений генетической информацией, полноценной в количественном и качественном (смысловом) отношении. Структура цикла и принципы его регуляции рассмотрены в главе 3. Здесь же речь идет о процессе самокопирования (самовоспроизведения) или реплика-ции1 ДНК в синтетическом (S) периоде интерфазы митотического цикла или же в гаметогенезе – перед первым делением мейоза.
Генетический материал эукариот имеет хромосомную организацию. В каждой хромосоме находится комплекс из двух взаимокомплементарных молекул (цепей) ДНК, закрученных в спираль. В ходе репликации вдоль каждой такой молекулы (цепи) «строится» комплементарная полинуклеотидная цепь. Репликация ДНК, таким образом, представляет собой симметричный процесс в том смысле, что обе молекулы биспирали выполняют роль матриц. Дезоксирибонуклеотиды выстраиваются в дочернюю молекулу в соответствии с правилом компле-ментарности: адениловый нуклеотид (А) встает в пару с тимидиловым (Т), а гуаниловый (Г) с цитидиловым (Ц) и наоборот. В итоге на основе одной биспирали ДНК возникают две, идентичные по информационному наполнению. Способ удвоения, при котором каждая возникающая вследствие репликации двойная спираль образована одной предсуще-ствующей материнской молекулой ДНК и одной заново образованной дочерней, называют полуконсервативным (рис. 2.25).
ДНК эукариот удваивается не одним блоком от начала и до конца биспирали, а участками или репликонами со средним размером порядка 30 мкм (1600 тыс. нуклеотидов в так называемой лидирующей цепи биспирали ДНК, см. здесь же, ниже). В ДНК хромосом соматической клетки человека насчитывается до 50 тыс. репликонов. В некоторых ре-пликонах удвоение ДНК происходит одновременно, в других – в раз-
1 Термин «репликация» обычно используют для обозначения самокопирования ДНК; термин «редупликация» чаще используют для обозначения удвоения хромосом.
Рис. 2.25. Полуконсервативный способ редупликации ДНК: I – материнская би-спираль ДНК; II – достраивание комплементарных полинуклеотидных цепей; III – две дочерние биспирали ДНК
ное время. Так, репликация ДНК гетерохроматиновых участков, будучи наиболее поздней, осуществляется в конце периода S. ДНК центромер-ных отделов хромосом удваивается даже не в периоде S интерфазы, а в начале анафазы предыдущего митоза непосредственно перед расхождением дочерних хромосом.
Самоудвоение происходит группами по 10-100 репликонов. Репли-конный формат самокопирования ДНК дает выигрыш по времени. Если бы молекула ДНК реплицировалась одним репликоном, то при скорости синтеза у человека порядка 0,5 мкм/мин (в среднем 100 п.н./с у эука-риот и 1500 п.н./с у прокариот) на удвоение хромосомы 1 (длина 8 см) потребовалось бы около 3 мес. Благодаря полирепликонной организации процесс самоудвоения всей ДНК в S периоде интерфазы занимает у млекопитающих, в среднем, 7-12 ч in vivo и 6-8 ч in vitro. Количество точек начала репликации (активируемых репликонов) и ее скорость меняется в зависимости от стадии индивидуального развития организма, типа клеток и стадии гистогенеза, на которой они находятся, условий их существования. Так, в сперматогониях на одну хромосому приходится в
среднем порядка 40 точек начала репликации (продолжительность периода S 15 ч), а на более поздних стадиях сперматогенеза в сперматоци-тах хромосомы имеют по 5-6 этих точек (продолжительность периода S 100 ч).
Для того чтобы пошла репликация, необходим пул субстратов (предшественников) в высоко энергизированном состоянии – дезок-сирибонуклеозидтрифосфаты тимина, аденина, цитозина и гуанина.
В процессе репликации ДНК выделяют фазы инициации (начало, старт), элонгации (удлинение, приращение) и терминации (завершение, окончание).
Хотя сама репликация происходит в периоде S (синтетический) интерфазы митотического цикла, пререпликативный комплекс образуется в периоде G1 (пресинтетический, постмитотический) интерфазы. Это сложный ферментный комплекс, включающий 15-20 белков, в частности, инициирующие («узнающие») белки, такие как ORS, Cdc6 и Mcm. Названный комплекс, благодаря белкам ORS, связывается с ДНК в точках инициации (начала) репликации. Отличительная черта этих точек – богатство парами А-Т. В таких парах 2 (а не 3, как в парах Г-Ц) водородные связи, что облегчает местную (в точке инициации) денатурацию ДНК с расхождением молекул двойной спирали. Образующиеся при этом одноцепочечные участки ДНК связываются дестабилизирующими белками комплекса (RPA – Replication Protein A эукариот или SSB – Single Strand Binding рroteins прокариот), молекулы которых выстраиваются вдоль полинуклеотидных цепей-матриц и «растягивают» их, делая азотистые основания доступными для присоединения нуклеотидов. Благодаря описанным событиям между соседними точками начала репликации образуется структура, получившая название « репликативный глаз» и соответствующая участку ДНК с разошедшимися («открывшимися» для репликации) полинуклеотидными цепями материнской биспирали. В точках начала репликации (точки ori) образуются репликативные вилки, начинающие процесс в двух взаимопротивоположных направлениях. С этого момента следует говорить не о пре-, а о репликативном комплексе (рис. 2.26). Такие комплексы являются мультимакромолекулярными образованиями, участники которых – специальные белки, в том числе ферменты – обеспечивают три функции: связь необходимых белков, включая ферменты, с точками начала репликации, раскручивание молекул ДНК и ее местную (в зоне репликации) денатурацию, непосредственно репликацию.
Рис. 2.26. Репликационный комплекс (репликационная вилка): главные участники процесса самокопирования ДНК (схема)
Разделение закрученных в биспираль полинуклеотидных цепей ДНК осуществляется ферментом геликазой при участии дестабилизирующего белка RPA. Местное разделение полинуклеотидных цепей при сохранении двуцепочечной структуры на остальном протяжении биспирали должно было бы приводить к образованию супервитков перед репликационной вилкой. Для снятия напряжения, с необходимостью возникавшего бы в такой ситуации, и создания условий для поступательного продвижения репликационной вилки вся материнская биспираль должна была бы быстро вращаться вокруг своей оси. Это высоко энергозатратный процесс. Эволюция нашла выход: ферменты ДНК топоизомеразы I и II , разрывая, соответственно, одну или обе цепи биспирали ДНК, создают возможность для локального вращения, что ослабляет напряжение и препятствует образованию супервитков.
Ферментом, катализирующим образование дочерних полинуклео-тидных цепей, является ДНК-полимераза, представляющая собой сложный мультимакромолекулярный комплекс. В репликативном образовании ДНК эукариот на отдельных этапах участвуют разные ферменты с функцией ДНК-полимеразы. На старте процесса функционирует комплекс из ферментов α ДНК-полимеразы и праймазы (ферменту
праймазе принадлежит роль РНК-полимеразы, что необходимо для синтеза РНК-праймера, см. здесь же, ниже). Указанный комплекс, будучи вытесненным с 3′-конца начавшей рост полинуклеотидной цепи, уступает место δ ДНК-полимеразе. В клетках эукариот присутствуют также β, ε ДНК-полимеразы, участвующие в процессах репарации молекулярных повреждений ДНК, и γ ДНК-полимераза, катализирующая репликацию ДНК митохондрий.
ДНК-полимеразы не способны начать синтез полинуклеотида самостоятельно путем соединения двух дезоксирибонуклеозидтрифос-фатов. Они лишь присоединяют при помощи фосфодиэфирной связи трифосфонуклеотид-предшественник к уже имеющейся нуклеотидной цепи на 3′-конце. В связи с этим инициация репликации ДНК требует предварительного образования затравки или праймера – короткого фрагмента РНК, образующегося при участии репликационного белка RPA и ферментного комплекса «α ДНК-полимераза-праймаза» (рис. 2.27). Из схемы следует, что матрицей для репликации может служить только молекула ДНК, несущая спаренный с ней РНК-праймер, который имеет свободный 3′-ОН-конец.
Построение одной из дочерних полипептидных цепей (лидирующая) на материнской матрице опережает построение второй (запаздывающая). Элонгацию обеих полинуклеотидных цепей ДНК катализирует фермент δ ДНК-полимераза. Кроме собственно фермента, в репликативный комплекс входят белки RFC – Replication Factor C и PCNA – Proliferating Cell Nuclear Antigen. Первый блокирует наращивание РНК-праймера на 3′-конце сверх требуемой длины. Второй играет роль «прищепки» или зажима, крепящего δ ДНК-полимеразу к реплици-руемой полинуклеотидной цепи. Участки ДНК лидирующей цепи синтезируются в пределах репликонов как непрерывные достаточно длинные фрагменты, тогда как ДНК запаздывающей цепи образуется короткими (у эукариот 1000-2000 нуклеотидов) участками – фрагменты Ока-заки. Смысл образования запаздывающей цепи фрагментами Оказаки заключается в том, что в пределах такого фрагмента наращивание молекулы происходит, как обычно, в направлении от 5′ к 3′-концу (по типу шитья «назад иголкой»), так как по-иному ДНК-полимераза не работает.
Завершение репликации (терминация) состоит в удалении РНК-праймеров, заполнении нуклеотидами образующихся при этом «брешей», «сшивании» фрагментов ДНК для восстановления целостности молекулы. В этой фазе процесса участвует группа ферментов: РНК-аза Н или просто нуклеаза Н (удаляет праймер, разрушая РНК в гибридных
Рис. 2.27. Образование РНК-затравки, катализируемое РНК-праймазой, в дебюте репликации ДНК (схема)
РНК/ДНК-комплексах; предположительно, у эукариот эту функцию выполняет δ ДНК-полимераза), β ДНК-полимераза (заполняет «бреши»), ДНК-лигаза («пришивает» фрагмент ДНК, заменивший РНК-праймер, к дочерней цепи). У эукариот репликационный синтез ДНК прекращается при встрече репликационных вилок соседних репликонов.
Полирепликонный формат построения лидирующей цепи и образование запаздывающей цепи фрагментами Оказаки приводит к тому, что по завершении процесса дочерние полинуклеотиды ДНК представлены отдельными участками. Целостность (непрерывность) молекул
восстанавливается благодаря активности фермента ДНК-лигазы, катализирующего, как и ДНК-полимераза, образование межнуклеотидной фосфодиэфирной связи. Особенность действия названного фермента в том, что он «сшивает конец в конец» только такие одноцепочечные участки, которые находятся в составе двухцепочечной ДНК.
Самокопирование вирусных и бактериальных ДНК имеет особенности. У прокариот ДНК реплицируется не прерываясь (как один репликон) с одной точки начала репликации и с образованием двух ре-пликационных вилок. Так как реплицирующаяся хромосома (ДНК) исходно кольцевой формы по конфигурации напоминает греческую букву θ (тета), то весь процесс получил название θ-репликации. У ряда вирусов – бактериофаг λ – наблюдается репликация по типу «катящегося кольца» или σ-репликация. Ключевой фермент репликации ДНК прокариот – ДНК-полимераза III. Функционируя в комплексе примерно с 20 белками, названный фермент строит единым блоком лидирующую и запаздывающую (фрагменты Оказаки) полинуклеотидные цепи. Завершение процесса в запаздывающей цепи требует подключения ДНК-полимеразы I, которая заполняет дезоксирибонуклеотидами участки, образующиеся на месте удаляемых праймеров. ДНК-полимераза I в рассматриваемом процессе выполняет три функции. Наряду с катализом образования ДНК на месте РНК-праймеров (ДНК-полимеразная активность), она обеспечивает удаление этих праймеров в запаздывающей цепи («передняя» или «от 5′ к 3’» экзонуклеазная активность), а также редактирование ДНК-текста путем удаления ошибочно встроившихся неспаренных нуклеотидов на растущем конце цепи («задняя» или «от 3′ к 5’» экзонуклеазная активность). ДНК-полимераза I прокариот является, по-видимому, функциональным аналогом одновременно нуклеазы Н, β ДНК-полимеразы и δ ДНК-полимеразы эукариот. ДНК-полимераза III (функциональный аналог α и δ ДНК-полимераз эукариот) лишена «передней» экзонуклеазной активности. ДНК-полимераза II участвует в процессе молекулярной репарации повреждений бактериальной ДНК.
Завершение (терминация) репликации у прокариот характеризуется своими особенностями. В ДНК прокариот присутствует участок из нескольких коротких (23 п.н.) последовательностей – сайты ter. Репликация завершается по достижении репликационной вилкой указанного участка в том случае, если с вышеназванными сайтами связывается продукт гена tus.
Известны примеры, когда механизм репликации, не будучи связанным с клеточным размножением, решает другие задачи. Это происходит,
в частности, при амплификации (увеличение числа ДНК-копий путем многократного самокопирования) генов рРНК в профазе первого деления мейоза при образовании яйцеклеток у амфибий (см. п. 2.4.3.4-а). В описанном случае используется вариант σ-репликации.
Самокопирование митохондриальной ДНК осуществляется с участием фермента γ ДНК-полимеразы. Репликация ДНК – сложный процесс. У человека, например, за процесс репликации и контроль клеточного (митотического) цикла ответственно более 400 генов. Некоторые из них активны на стадии инициации, другие – на стадии элонгации. Далеко не все детали организации и функционирования «репликационной машины» в достаточной мере ясны.
Источник